一、试剂准备

1. DNS试剂的配制：
   • 准确称取3,5-二硝基水杨酸（C7H4N2O7）粉末6.3g，溶解于500ml蒸馏水中。
   • 在60°C水浴锅处理，加入21.0g NaOH并震荡，使其充分溶解。
   • 加入182.0g酒石酸钾钠、5.0g苯酚（液体）、5.0g偏重亚硫酸钠，用玻璃棒搅拌至溶解。
   • 冷却后，移入1000ml容量瓶中定容。
   • 将配置好的溶液置于棕色瓶中，常温存放一周后方可使用。
2. 葡萄糖标准溶液的配制：
   • 准确称取在95℃烘至恒重的分析纯葡萄糖5mg，置于10ml离心管中。
   • 加入5ml水，锡纸包裹后于4℃冰箱中保存备用，有效期最多一周，此为1mg/ml的葡萄糖标准液。
   • 用水和1mg/ml葡萄糖标准液，配制成0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.6mg/ml、0.8mg/ml的葡萄糖标准液。

二、标准曲线的绘制

1. 取各浓度葡萄糖标准液1ml于50ml离心管中。
2. 加入配好的DNS试剂2ml，沸水浴加热（如固定电磁炉功率1600W）3分钟，溶液出现黄色或棕红色。
3. 冷却后，每个样取200μl放入酶标板中，平行取三次并记录顺序。
4. 使用酶标仪，在540nm波长下测定吸光度。
5. 以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，使用Excel等工具绘制标准曲线。

三、样品测定

1. 取待测样液1ml于50ml离心管中。
2. 加入配好的DNS试剂2ml，沸水浴加热（条件同上）3分钟，溶液同样出现黄色或棕红色。
3. 冷却后，按标准曲线绘制时的操作，取适量溶液放入酶标板中，并使用酶标仪在540nm波长下测定吸光度。
4. 根据测得的吸光度，在标准曲线上找到对应的还原糖浓度，从而得到样品中还原糖的含量。

四、注意事项

1. DNS试剂在配制和使用过程中应避免接触皮肤和眼睛，如不慎接触，应立即用大量清水冲洗并就医。
2. 标准曲线和样品测定应在相同条件下进行，以确保结果的准确性。
3. 样品在测定前应进行适当的预处理，如酸水解或酶解等，以释放出还原糖。
4. 测定过程中使用的仪器和设备应经过校准和验证，以确保其准确性和可靠性。

通过以上步骤，可以使用DNS试剂准确测定样品中的还原糖含量。这种方法不仅适用于食品、饮料和生物样本中还原糖的测定，还可用于半纤维素和其他多糖降解产物的研究中。